将CIK细胞与负载肿瘤外泌体的DC细胞共培养，并添加粒细胞单核激活刺激因子、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4单克隆抗体、程序性死亡受体1的单克隆抗体和白介素-2的制备方法

《一种高扩增型DC-CIK细胞及其制备和应用》新获国家发明专利证书。中科细胞创造性地提出了将CIK细胞与负载肿瘤外泌体的DC细胞共培养，并添加粒细胞单核激活刺激因子、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4单克隆抗体、程序性死亡受体1的单克隆抗体和白介素-2的制备方法，该制备方法可以长时间维持DC细胞的活性，使其顺利呈递抗原，且降低了封闭负调节机制的影响，增强了CIK细胞的增殖速度和杀伤活性，还显著提升了DC-CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用、助力科研、现代化医疗的进展。

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced  killer  cells，CIK)是介导细胞毒活性最强的免疫效应细胞，兼具有T淋巴细胞的高度杀瘤活性和NK细胞非主要组织相容性复合物(MHC)的限制性杀瘤效应，CIK细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，具有增殖速度快，杀瘤活性高，杀瘤谱广等优点。

通过注射的方式将CIK输送至体内，CIK能够产生迅速及准确的免疫反应，使得人体的免疫能力在一段时间内提高，并能够高效地消除病菌、肿瘤细胞。因此，CIK有提高免疫力的作用，能够在回输后的一段时间内持续地在体内消除病菌，达到机体年轻，减缓病程的作用。

树突状细胞(Dendritic cells，DCs)是体内最有效的抗原提呈细胞，表面表达多种共刺激分子，激活辅助T细胞，促使其分泌白介素-2等细胞因子，传递特异性抗原信号，最终活化细胞毒性T细胞。DC-CIK是指将肿瘤抗原诱导成熟的DC细胞与CIK细胞共同培养，既可以促进DC细胞的成熟，又能增强CIK细胞中细胞毒T细胞的含量，从而发挥对肿瘤特异性的杀伤作用，达到清除肿瘤微小病灶的目的。因此，DC-CIK共同培养具备比CIK单独培养更强的杀伤作用，更强的杀瘤活性。

肿瘤细胞所释放的外泌体(exosomes)表面携带有MHC分子和抗原肽，可以增强DC‑CIK的细胞毒活性，刺激产生特异性的抗瘤T细胞，并得到具有特异性和非特异性双重抗瘤作用的DC-CIK细胞，因此负载肿瘤外泌体的DC细胞与CIK共培养能够提升免疫作用，达到更好的杀伤肿瘤的作用。

目前，现有的方法是将负载肿瘤外泌体的DC细胞添加到CIK培养体系中，从而通过负载肿瘤外泌体的DC细胞与CIK细胞的结合，将DC细胞携带的负载肿瘤外泌体的抗原信息提成给CIK细胞。但存在以下问题：（1）CIK培养环境不利于DC细胞生长（2）DC细胞成熟慢、生存期短，CIK细胞的扩增培养时间较长，两种细胞共培养时存在培养时间不同步的问题（3）肿瘤微环境中CIK细胞表面CTLA‑4和PD‑1m Ab表达量升高，与DC上相应配体结合，导致免疫细胞出现负调控机制，一定程度上抑制了CIK细胞的杀伤功能。因此目前的现有方法没有办法达到优于CIK杀瘤作用的效果。

基于此，中科细胞该项新发明的授权，为这些问题的解决提供了一种新的创新方案。首先，这种高扩增型DC-CIK细胞在共培养过程中相互作用、相互促进，可以增强免疫细胞的活性和功能，进而提高了治疗效果,还可以增强免疫记忆效应，能够保持对目标肿瘤细胞的识别和攻击能力，提供更长期的抗肿瘤保护。在共培养中两者相互影响，可以扩大适用的病种范围，克服了传统治疗策略的限制,进一步增强杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性识别和杀伤效力。相较于某些传统的治疗方法，细胞因子诱导的杀伤细胞和树突状细胞共培养具有较高的特异性，可以针对肿瘤细胞特异表达的抗原进行识别和攻击，减少了对正常细胞的伤害，从而降低了毒副作用。

总而言之，细胞因子诱导的杀伤细胞和树突状细胞共培养能够提高治疗效果，并具有增强免疫记忆效应、拓宽适应病种范围和减少毒副作用等价值和意义。这一发明专利在肿瘤免疫治疗领域具有广泛的应用前景，并为患者提供更有效、更安全的治疗选择。